Analisi PCR per l'interpretazione qualitativa dell'epatite C dei risultati

Dato il decorso asintomatico e l'elevata probabilità di trasmissione dell'infezione da HCV, la diagnosi nelle prime fasi della patologia è di grande importanza. La più accurata è la formulazione della reazione a catena della polimerasi. A differenza dei metodi per rilevare i marcatori sierologici, la PCR dipende poco dalle malattie concomitanti e dalle condizioni generali del corpo del paziente. Ma se viene confermato il virus dell'epatite C, è obbligatoria un'analisi quantitativa, la cui decodifica viene eseguita da un medico,.

L'HCV è una malattia grave che richiede reazioni avverse gravi e costose. Pertanto, la diagnosi non viene mai fatta sulla base dei risultati di uno studio. Se si sospetta una malattia virale, il paziente deve sottoporsi a diversi test. Ma al fine di evitare costi inutili e perdita di tempo, gli esami del sangue e gli esami strumentali vengono eseguiti in più fasi.

Le fasi principali del processo diagnostico sono mostrate nella tabella:

Ricerche in corsoObiettivi prestazionali
Analisi biochimiche di esami del sangue e del fegatoConsente di valutare l'attività funzionale del fegato, il livello di bilirubina, gli indicatori delle transaminasi epatiche. Il superamento della norma di 2 o più volte indica la presenza di una malattia
Test clinici di sangue, urina e feciQuesti studi non sono specifici, ma i risultati possono stabilire la presenza di un processo infiammatorio, valutare le condizioni generali del paziente. Rilevazione della bilirubina nelle urine, un cambiamento nel colore delle feci parla a favore del danno epatico
Saggio di immunosorbenti enzimatico (ELISA)Ti permette di determinare sia la presenza di un'infezione virale nel corpo sia la sua forma (acuta o cronica). Lo svantaggio dello studio è la probabilità di risultati falsi.
Reazione a catena della polimerasiCostoso, difficile da condurre, ma allo stesso tempo il metodo diagnostico più accurato per l'HCV. Ti consente di confermare la presenza del virus nel corpo umano, quantificare il livello di copie di RNA, determinare il genotipo dell'HCV
Esami strumentali del fegatoÈ necessario condurre un'ecografia degli organi addominali, stabilire lo stadio della fibrosi, valutare la gravità della cirrosi, escludere il carcinoma epatocellulare

Il medico effettua la diagnosi finale solo in base ai risultati indicati in tutti gli studi. Alcuni farmaci, ad esempio gli epatoprotettori, le vitamine sono mostrati già all'inizio del processo diagnostico. Ma gli agenti antivirali mirati sono prescritti dopo aver ricevuto tutti i dati.

Cos'è la PCR?

La tecnica di reazione a catena della polimerasi è nota da molto tempo ed è stata utilizzata con successo per diagnosticare una serie di malattie virali e l'HCV non fa eccezione.

Attualmente, esistono diversi metodi per impostare la PCR, ma in linea di principio questo processo consiste in diverse fasi:

  1. La distruzione di un doppio filamento di DNA sotto l'influenza del calore o di determinati prodotti chimici.
  2. Unendo i cosiddetti primer, residui della catena nucleotidica dell'RNA del virus, al DNA separato da una base di DNA (nella maggior parte dei moderni sistemi di test, vengono utilizzate le regioni 5`-NTR del genoma dell'HCV).
  3. Un enzima specifico, la DNA polimerasi, riconosce un primer, provoca l'aggiunta di altri residui nucleotidici.

Alla fine del terzo stadio della reazione a catena della polimerasi, il DNA tra due primer raddoppia e, successivamente, il genoma viene amplificato in modo esponenziale (2-4–8, ecc.).

La sensibilità dei moderni sistemi di test è di 10-50 copie di RNA in 1 ml di sangue.

La decodifica della PCR per l'epatite C deve essere eseguita da uno specialista qualificato. In conformità con lo standard internazionale dell'OMS, un campione di plasma sanguigno in forma liofilizzata contenente RNA del primo genotipo virale ad una concentrazione di 105 UI / ml viene utilizzato per quantificare il genoma virale.

Allo stesso tempo, viene attirata l'attenzione sulle unità quantitative in cui sono espressi i risultati della ricerca. Tipicamente, il numero di copie dell'RNA dell'HCV è indicato in termini assoluti o logaritmici. Quindi, in conformità con gli standard internazionali, questa cifra viene convertita utilizzando un coefficiente speciale in unità internazionali (UI). Pertanto, i risultati finali sono indicati in UI / ml.

Per condurre uno studio quantitativo, vengono utilizzati vari sistemi di test e metodi per la formulazione della reazione a catena della polimerasi. Alcuni sono progettati per misurare la viremia plasmatica o sierica. Altri sono più efficaci e indicativi nello studio del sangue intero..

Parlare della norma nell'interpretazione dei risultati indicati nel modulo di laboratorio non è del tutto corretto. Il fatto è che in una persona sana non c'è RNA virale nel corpo e la presenza di particelle di HCV, indipendentemente dall'indicatore quantitativo, indica un'infezione. In futuro, usando la PCR per valutare l'efficacia del trattamento. Con un risultato negativo a 4 settimane di assunzione del farmaco e poi dopo la fine della terapia antivirale (per 48 settimane), parlano di recupero.

Tipi di ricerca

La realizzazione di una reazione a catena della polimerasi comporta non solo la determinazione della presenza di RNA dell'HCV nel sangue, ma anche la determinazione del numero di copie del virus e l'analisi della struttura del genoma. Tali capacità rendono la PCR uno dei metodi più informativi e precisi per diagnosticare l'epatite virale C..

Tutti i metodi pratici per la formulazione della reazione a catena della polimerasi sono riportati di seguito nell'ordine di condotta (ogni test successivo è prescritto con un risultato positivo del precedente):

  1. L'analisi PCR di alta qualità per l'epatite C viene eseguita solo per la rilevazione dell'RNA del virus nel sangue.
  2. Test PCR quantitativo. La decrittografia viene eseguita in conformità con gli standard generalmente accettati. A seconda del risultato, la carica virologica può essere bassa, moderata o alta. Questo indicatore è uno dei predittori dell'esito del trattamento dell'HCV..
  3. Genotipizzazione (in molti laboratori privati ​​è offerto in combinazione con analisi quantitative, che riduce il costo totale). La designazione del genotipo HCV viene effettuata da uno dei numeri arabi (da 1 a 6). Sul territorio della Russia, il genotipo 1 o 3 viene più spesso rilevato, un po 'meno spesso - 2, 4–6 vengono diagnosticati in casi isolati. In precedenza, quando si utilizzavano regimi di trattamento con interferone, una varietà di HCV determinava la durata e l'efficacia della terapia. I moderni agenti antivirali hanno un ampio spettro di azione, ma alcuni di essi sono prescritti solo con 1-4 genotipi di HCV.

La genotipizzazione viene eseguita una sola volta, prima di iniziare la terapia. Man mano che vengono assunti i farmaci, le norme quantitative dell'epatite C sono necessarie al medico per valutare l'efficacia dei farmaci antivirali. Dopo il corso del trattamento, viene condotto uno studio qualitativo sulla PCR..

Caratteristiche dell'analisi quantitativa

L'analisi quantitativa mediante PCR viene eseguita per determinare la carica virale. Con questo termine si intende il numero di copie dell'RNA dell'agente patogeno in 1 ml di sangue.

Grazie a tale studio, il medico sarà in grado di valutare una serie di fattori che svolgono un ruolo chiave sia nel decorso della malattia che nel risultato della terapia. It:

  • la probabilità di complicanze (cirrosi e carcinoma epatocellulare), poiché più attivo è il processo patologico, maggiore è il rischio di patologie epatiche nelle fasi iniziali dell'epatite C;
  • l'efficacia del regime di trattamento standard (nei casi più gravi è richiesta un'ulteriore prescrizione di agenti antivirali);
  • rischio per gli altri (specialmente se il paziente appartiene a segmenti socialmente sicuri della popolazione, ha una famiglia, figli);
  • il rischio di complicanze extraepatiche (sviluppo di malattie autoimmuni, danni al sistema nervoso, cardiovascolare, ecc.).

La quantificazione dell'RNA dell'HCV è importante anche per monitorare l'efficacia del trattamento. Mentre continui a prendere farmaci antivirali, i numeri che ricevi diminuiscono. Lo scopo della terapia è quello di ottenere un risultato negativo di un'analisi qualitativa mediante PCR..

indicazioni

Prima della comparsa di un gran numero di laboratori privati, in cui il paziente può eseguire quasi tutte le analisi senza documenti da un medico, la direzione per eseguire la PCR quantitativa è stata data in una determinata fase della diagnosi o del trattamento.

In conformità con gli standard e i protocolli dell'OMS, le indicazioni per tale studio sono:

  • marcatori sierologici positivi di HCV (totale anti-HCV, presenza di immunoglobuline di classe G e / o M);
  • risultato positivo della PCR di qualità;
  • monitoraggio del trattamento.

Se lo si desidera, il paziente può rivolgersi autonomamente a una clinica privata ed eseguire uno studio simile. Ma in assenza di epatite C, un simile test di laboratorio è considerato inappropriato.

Quali fasi della malattia siamo

Per determinare la carica virale, le seguenti date:

  • prima di iniziare il trattamento (possibilmente contemporaneamente alla genotipizzazione);
  • 4 settimane di trattamento (i dati negativi indicano una risposta virologica rapida e prevedono esiti predittivi);
  • l'ultima settimana del corso terapeutico (12 o 24, a seconda dello schema selezionato), un risultato negativo conferma l'efficacia della terapia, uno positivo richiede un ulteriore trattamento, ma con l'uso di altri medicinali;
  • 24 e 48 settimane dopo la fine del ciclo di trattamento (indipendentemente dalla sua durata), l'assenza di carica virale conferma il recupero.

Inoltre, lo studio viene condotto solo secondo le indicazioni (ad esempio, deterioramento della salute, errori nell'assunzione delle compresse, identificazione di infezioni concomitanti, ecc.). La PCR non esclude la necessità di altre analisi: studi clinici su sangue e urine, esami del fegato, ultrasuoni e altri.

Come prepararsi allo studio

Affinché la decodifica dell'analisi PCR non sia errata, è necessario prepararsi adeguatamente per il prelievo di sangue. Con alcune eccezioni, le regole non differiscono da quelle di altri studi..

È necessario:

  • donare il sangue rigorosamente a stomaco vuoto (ultimo pasto 12 ore prima di visitare il laboratorio);
  • la procedura viene eseguita al mattino (il più presto possibile);
  • il giorno dell'analisi, dopo esserti svegliato, puoi bere solo acqua; tè, caffè, bibite gassate e / o dolci, succhi di frutta, ecc. controindicato;
  • 3-5 ore prima di donare il sangue non è possibile fumare;
  • se è impossibile interrompere l'assunzione di qualsiasi farmaco, indicare i nomi dei farmaci da assumere all'assistente di laboratorio e al medico che interpreterà i dati.

La presenza di epatite C implica già un completo rifiuto dell'alcol e una dieta rigorosa (tabella n. 5). Ma se l'analisi viene effettuata nella fase di diagnosi, 5-7 giorni prima del prelievo di sangue, il monitoraggio nutrizionale è obbligatorio ad eccezione dei prodotti pesanti per il fegato e dell'alcool.

Decifrare l'analisi quantitativa per l'epatite C

Di solito, quando il paziente riceve i risultati dei test a portata di mano, il modulo visualizza i valori normali, i valori ottenuti e una breve interpretazione. Tuttavia, la decodifica di un esame del sangue per l'epatite C deve essere eseguita solo da un medico. La PCR quantitativa è una delle fasi della diagnosi, pertanto il medico confronta le cifre con i risultati precedentemente ottenuti.

A seconda degli indicatori ottenuti, viene determinato il grado di carica virale o la completa assenza di RNA di HCV nel corpo.

Se viene eseguita un'analisi quantitativa per l'epatite C, la decrittazione viene eseguita secondo la tabella:

Valore dell'indicatoreLivello di carico virale
Nessun virus RNA rilevato (o il numero di copie è inferiore alla sensibilità del sistema di test)Normalmente, la persona è sana o l'analisi è stata effettuata durante il periodo di incubazione della patologia
1,8 × 102–7,9 × 105 UI / mlBassa carica virale. Indica infezione recente, latenza o efficacia antivirale.
8 × 102–2,3 × 107 UI / mlCarico virale moderato. Di solito è notato nella forma cronica di HCV. La prognosi del trattamento è favorevole, soggetta alle raccomandazioni del medico
2,4 × 107 UI / ml e superioreAlta viremia Sono molto probabili gravi complicazioni (fino al cancro del fegato)

Al fine di decrittografare accuratamente l'analisi e prevenire risultati errati, è possibile valutare i dati della PCR quantitativa solo dopo aver identificato i marcatori sierologici della PCR qualitativa. Con IFA, è necessariamente indicato un coefficiente positivo. Tenere anche conto dei dati dell'esame ecografico, dell'elastografia e della biopsia, se lo studio è stato condotto.

Norma

L'analisi quantitativa della PCR viene eseguita solo se altri emocromi sono positivi per l'epatite C..

Ottenere un risultato negativo è possibile con:

  • autorigenerazione (nella letteratura medica ci sono statistiche secondo le quali circa il 15% delle infezioni da HCV passa inosservato, il sistema immunitario umano elimina completamente il virus);
  • risposta virologica precoce (durante la valutazione dei risultati durante la terapia antivirale);
  • in caso di dati errati provenienti da studi precedenti (è improbabile, dal momento che ELISA, PCR di alta qualità e test epatici sono di solito prescritti per primi).

Quando viene eseguito un test dell'epatite C per valutare la carica virologica, la trascrizione viene eseguita dal medico. Si ritiene che gli indicatori normali siano la completa assenza di RNA dell'HCV nel sangue. Ma per escludere un'infezione latente, si raccomanda di ripetere lo studio tra qualche settimana..

Quali conte ematiche indicano l'epatite C

Prima di iniziare un esame diagnostico, è necessario sapere esattamente quali conte ematiche indicano HCV. Da un lato, ciò consentirà al paziente di evitare spese finanziarie non necessarie per analisi non necessarie, dall'altro, farà risparmiare tempo.

Quindi, con l'epatite C, i seguenti dati sono indicativi:

  • ELISA positivo indipendentemente dalla classe di anticorpi rilevati; ma questo parametro viene valutato in base ad altri risultati, poiché alcune caratteristiche del sistema immunitario possono influenzare l'accuratezza dello studio;
  • PCR qualitativa positiva (la sensibilità e la specificità del metodo raggiunge il 100%);
  • determinazione del numero di copie del virus durante la PCR quantitativa.

I segni indiretti di HCV sono transaminasi epatiche in eccesso, bilirubina, leucocitosi, VES accelerata, presenza di bilirubina nelle urine.

Quando si decodificano i risultati, vengono prese in considerazione le riduzioni, poiché l'epatite C è indicata nelle analisi. Tipicamente, la carica virale è indicata in UI / ml o UI / ml e l'RNA del virus è l'acronimo inglese RNA HCV.

C'è un falso test

Contrariamente a ELISA, la probabilità di un falso risultato di PCR è praticamente zero. Gli errori sono possibili solo a causa del fattore umano, cioè in violazione delle regole per il prelievo di sangue, la conservazione dei campioni e la conduzione diretta dello studio.

Vantaggi della quantificazione della PCR

Gli specialisti nel campo dell'epatologia sottolineano che la PCR quantitativa non ha analoghi ed è uno dei principali studi per i pazienti con HCV. Il motore di analisi riduce al minimo la probabilità di risultati falsi positivi o falsi negativi..

Ci vogliono diversi giorni per ottenere i risultati. Il prelievo di sangue non richiede una preparazione speciale, è possibile in quasi tutti i laboratori clinici e non è accompagnato da alcun dolore significativo. Ma il vantaggio principale di questa analisi è la sua elevata precisione, che raggiunge il 100%.

Analisi qualitativa della PCR per l'epatite C

epatologo

Specialità correlate: gastroenterologo, terapista.

Indirizzo: San Pietroburgo, Accademico Lebedev St., 4/2.

L'epatite è una malattia grave che ha molte cause. Al centro del suo sviluppo è il danno epatico diretto o indiretto. Data la sua importanza per l'intero organismo, si può solo immaginare quanto sia difficile la patologia. In questo articolo, analizzeremo più in dettaglio il decorso e la diagnosi di laboratorio dell'epatite C..

La causa della malattia è un agente virale, che si riferisce ai patogeni contenenti RNA. Ha una caratteristica distintiva: la capacità di mutare, cioè di cambiare la sua struttura. A causa di ciò, l'infezione sfugge all'attacco del sistema immunitario e nella maggior parte dei casi porta a un'infiammazione cronica nel fegato.

Data l'esistenza di vari sottotipi del virus, la selezione dei farmaci deve essere effettuata tenendo conto dei risultati della genotipizzazione. Nonostante un lungo studio della malattia e delle caratteristiche strutturali dell'HCV, non è stato ancora possibile sviluppare un vaccino specifico contro la malattia.

Le difficoltà nella diagnosi precoce sono l'epatite asintomatica, a seguito della quale una persona va dal medico nella fase della cirrosi. Al fine di rilevare la malattia in tempo, sono necessari regolari esami medici. Solo attraverso esami del sangue di laboratorio è possibile rilevare HCV e prevenire l'infezione di altri. Il fatto è che il portatore dell'infezione per lungo tempo non può indovinare la patologia e continuare a trasmettere il virus a persone sane.

Modi di trasmissione

Il virus nella maggior parte dei casi si diffonde attraverso il sangue, poiché contiene la più alta concentrazione di agenti patogeni. Pertanto, l'infezione viene trasmessa:

  • con emodialisi;
  • quando iniettato con un ago infetto;
  • nel corso di un combattimento, quando la pelle è ferita e si verifica il contatto con il sangue;
  • con trasfusione di sangue (trasfusione di sangue).

La probabilità di infezione da intimità è trascurabile, poiché lo sperma e le perdite vaginali contengono una piccola quantità di agenti patogeni. Il rischio di infezione aumenta in modo significativo con una violazione dell'integrità della mucosa genitale. Questo si osserva con il sesso aggressivo e anale.

Per quanto riguarda il metodo verticale di trasmissione dell'infezione, viene eseguito nel processo del travaglio. Nel periodo di gestazione, l'agente patogeno non può penetrare nella placenta nell'embrione. Nelle nascite naturali, l'agente patogeno viene trasmesso al bambino quando la sua pelle è ferita quando si osserva il contatto con il sangue della madre..

Dopo che l'agente patogeno entra in un corpo sano, inizia la sintesi di anticorpi, che sono protezione contro le infezioni e appartengono alle strutture immunitarie. Si trovano durante lo studio iniziale di una persona che utilizza ELISA.

Per confermare la diagnosi, il paziente subisce una reazione a catena della polimerasi. È un'analisi per identificare il materiale genetico di un agente patogeno e determinare la carica virale..

Diagnosi di laboratorio dell'epatite C

La diagnosi di laboratorio inizia con un dosaggio di immunosorbenti enzimatico. Il suo compito principale è quello di rilevare gli anticorpi prodotti contro il patogeno. La sua efficacia è quasi del 95%. Grazie a questo studio, nella fase preclinica, è possibile identificare il portatore del virus e inviarlo per un ulteriore esame.

Un ELISA qualitativo indica la presenza o l'assenza di immunoglobuline nel sangue del paziente. Il risultato può essere "positivo" o "negativo". Dopo aver ricevuto la prima risposta, la persona viene inviata al prossimo esame - PCR. Il suo prezzo dipende dalla qualità dei reagenti e del laboratorio. Il costo della reazione a catena della polimerasi può raggiungere i 4 mila rubli.

Caratteristiche della PCR

Usando una reazione a catena della polimerasi, anche una piccola quantità di materiale biologico ci consente di stimare la carica virale nel sangue, cioè di calcolare la concentrazione di agenti patogeni in un millilitro di liquido.

Con l'avvento della PCR, la diagnosi di epatite è diventata molto più semplice. L'analisi consente di identificare l'RNA dell'HCV, stabilire lo stadio del processo infettivo e l'infettività del portatore del virus.

Esistono diverse varietà di diagnosi genetica:

  1. analisi qualitativa della PCR per l'epatite C - conferma la presenza o l'assenza di HCV nel sangue del soggetto:
  2. quantitativo, grazie al quale è possibile calcolare la concentrazione di virus e stabilire lo stadio della malattia. Il risultato è indicato in UI / ml o copie / ml (a seconda del laboratorio);
  3. genotipizzazione: necessaria per determinare il genotipo dell'HCV. Ciò è necessario per l'accurata selezione dei medicinali che saranno più efficaci in questo caso. L'analisi indica indirettamente la gravità del processo patologico nel fegato. Quindi, con il terzo genotipo patogeno, si osserva più spesso la steatosi, il cui sviluppo si basa sull'accumulo di grasso negli epatociti (le sue cellule). Inoltre, il tipo di virus influenza l'esito e la durata del decorso terapeutico..

Analisi qualitativa della PCR per l'epatite C

Prima di tutto, in laboratorio, viene esaminato il materiale biologico per la presenza di HCV RNA. È importante ricordare che un'analisi qualitativa per l'epatite C ha un certo livello di sensibilità e quindi non può sempre dare la risposta corretta. In questo caso, si consigliano ripetute diagnosi di laboratorio utilizzando altri reagenti..

Per ottenere risultati affidabili, è necessario utilizzare sistemi di test con una sensibilità di almeno 50 UI / ml..

Il risultato diagnostico può essere "positivo" o "negativo". Se l'agente patogeno non viene trovato nel sangue, lo studio termina. Se viene rilevato un agente patogeno nel campione, viene eseguito un calcolo quantitativo della carica virale..

Una risposta falsa negativa si ottiene quando viene violato il processo tecnologico, ad esempio componenti attivi che inibiscono la costruzione di copie dell'agente patogeno entrano nell'ambiente. Pertanto, non è possibile visualizzare il vero quadro del sangue, a causa del quale non viene diagnosticata l'infezione umana..

Un risultato falso positivo può essere ottenuto se la provetta per la raccolta di materiale biologico e l'ambiente per lo studio fossero contaminati. Inoltre, una tale risposta di analisi è possibile con infezioni miste, quando il fegato è influenzato da diversi virus, ad esempio l'epatite C e D.

Indicazioni per la ricerca qualitativa

Il medico può prescrivere uno studio qualitativo al paziente per l'identificazione dell'RNA del virus dell'epatite C:

  • al ricevimento di una risposta positiva o dubbi di un test immunoenzimatico;
  • per verificare la diagnosi;
  • determinazione della carica virale;
  • impostare lo stadio della malattia;
  • diagnosi di infezione mista. L'epatite C colpisce spesso il fegato contemporaneamente al virus D;
  • determinazione delle tattiche terapeutiche basate sul genotipo patogeno;
  • valutazione della dinamica dei cambiamenti durante il trattamento con farmaci antivirali.

I vantaggi della reazione a catena della polimerasi includono:

  1. elevata sensibilità della tecnica, che consente di stabilire il fatto di infezione nella fase preclinica;
  2. identificazione del materiale genetico del patogeno e non anticorpi ad esso;
  3. la capacità di stabilire un sottotipo di agente patogeno;
  4. alta velocità diagnostica, poiché non è necessario seminare il materiale su un mezzo nutritivo, ma è sufficiente utilizzare sistemi di prova specifici. Una persona ottiene il risultato dopo 5 ore;
  5. universalità. L'analisi consente di identificare qualsiasi materiale genetico (RNA, DNA). Grazie a questo, il medico può confermare l'epatite C e altri tipi di malattia (B);
  6. la possibilità di rilevare un'infezione latente.

Ricerca quantitativa

In un esame del sangue che utilizza una reazione a catena della polimerasi, è possibile calcolare il numero di agenti patogeni in un volume fisso di materiale biologico. L'indicatore è presentato in UI / ml. Grazie all'analisi, è possibile stabilire il grado di infettività del paziente, determinare lo stadio del processo infettivo e anche valutare l'efficacia della terapia farmacologica.

Sulla base della PCR, lo specialista decide quali dosi di farmaci possono bloccare la moltiplicazione dei patogeni. Inoltre, vengono determinati la durata del trattamento antivirale e la prognosi per la vita. È importante ricordare che i sistemi di test sono altamente sensibili, quindi il metodo consente di confermare l'infezione di una persona anche nella fase preclinica.

genotipizzazione

Data la capacità del patogeno di mutare, è necessario il suo genotipo per determinare le tattiche di trattamento e selezionare i farmaci antivirali. Ad esempio, il trattamento per l'epatite da HCV 1 dura 48 settimane, con una dinamica positiva osservata solo nel 60% dei casi. I genotipi 2 e 3 hanno una prognosi più favorevole. I farmaci antivirali sono prescritti per 8 mesi e la loro efficacia raggiunge l'85%.

Secondo le statistiche, nella maggior parte dei casi HCV 1, 2 e 3 sono registrati nella Federazione Russa.

Quando si decodifica un test di laboratorio, è possibile che venga indicata una risposta del genere: "non digitata". Ciò significa che un virus circola nel sistema circolatorio del paziente che non può essere riconosciuto dal sistema di test. Il risultato dell'analisi in questo caso indica un'infezione di una persona con un agente patogeno atipico per una determinata area geografica.

Come ottenere risultati affidabili?

Affinché uno studio qualitativo della PCR rilevi l'RNA del patogeno dell'epatite C per mostrare i risultati corretti, è necessario soddisfare i requisiti per la preparazione alla diagnosi di laboratorio:

  1. il prelievo di sangue viene effettuato a stomaco vuoto e il periodo "affamato" non deve essere inferiore a 8 ore;
  2. due giorni prima dello studio, si raccomanda di smettere di bere alcolici e di rifiutare cibi piccanti, grassi e affumicati;
  3. annullare l'introduzione di farmaci che riducono la coagulazione del sangue, ad esempio l'eparina. Se questi medicinali sono prescritti per motivi di salute, è necessario avvertire il medico di questo. Inoltre, lo specialista dovrebbe essere consapevole di assumere altri farmaci che possono influenzare il risultato di un test di laboratorio;
  4. alla vigilia della raccolta di materiale biologico, le procedure fisioterapiche non devono essere eseguite e soggette a pesanti sforzi fisici.

I risultati dell'analisi possono essere influenzati non solo dalla persona che dona il sangue, ma anche da altri fattori, vale a dire:

  • scarso prelievo di sangue;
  • inosservanza delle raccomandazioni per il trasporto di materiale biologico;
  • formazione insufficiente del personale di laboratorio;
  • inosservanza della tecnica di ricerca;
  • l'introduzione di anticoagulanti (eparina) alla vigilia del prelievo di sangue. Questo gruppo di farmaci riduce la coagulazione, rallentando così il lavoro dei reagenti.

In diversi laboratori, la risposta diagnostica può variare leggermente, tuttavia, questi errori non influiscono sul risultato finale dello studio..

Particolare attenzione è rivolta ai tipi di sistemi di test utilizzati in laboratorio. Reagenti con alta sensibilità sono spesso preferiti. Questo è importante per i pazienti con bassa carica virale perché è difficile da rilevare..

Con quale frequenza vengono effettuati i test di laboratorio?

La reazione a catena della polimerasi primaria viene eseguita per le persone che, quando il saggio di immunosorbenti enzimatici è stato rilevato, hanno rilevato anticorpi contro l'agente causale dell'epatite. In questo caso, viene prescritto per confermare il fatto di infezione di una persona e stabilire lo stadio della malattia. Inoltre, l'analisi consente di determinare il sottotipo del virus, che è particolarmente importante per la scelta dei farmaci.

Il prossimo periodo per i test di laboratorio obbligatori è di 3 mesi dall'inizio della terapia antivirale. La diagnosi consente di valutare l'efficacia dei farmaci, regolare la dose o sostituirli.

Oltre ai test di base, la PCR può essere eseguita anche a 4 e 24 settimane dall'inizio del trattamento. Una prognosi positiva della malattia è confermata da una diminuzione della carica virale dopo tre mesi di terapia. Quindi, ad esempio, dovrebbe diminuire da 1 milione UI / ml a diverse centinaia di migliaia.

Se la concentrazione di agenti patogeni nel sangue rimane allo stesso livello o aumenta leggermente, ciò indica l'inefficacia degli agenti antivirali e richiede la sostituzione. Utilizzando la PCR al termine del trattamento, è possibile confermare il recupero del paziente.

Per interpretare correttamente i risultati della diagnostica di laboratorio, è necessaria la consultazione di un epatologo o di uno specialista in malattie infettive. Data l'elevata frequenza di false risposte nell'ELISA, l'analisi viene utilizzata esclusivamente per lo screening primario. Per un esame più approfondito del paziente, viene utilizzata una reazione a catena della polimerasi..

Accurati test dell'epatite C.

La diagnosi accurata dell'epatite C viene eseguita solo in laboratorio attraverso esami del sangue del paziente. Esistono diverse tecniche utilizzate per questo:

  • saggio di immunoassorbimento enzimatico - ELISA, che consente di determinare la presenza di anticorpi contro l'epatite C. Nelle diverse fasi dello sviluppo della malattia, nel sangue vengono rilevati diversi tipi di anticorpi: IgM, IgG;
  • reazione a catena della polimerasi: la PCR è un'analisi efficace e accurata del 100% per l'epatite C, poiché consente di identificare direttamente l'RNA del virus dell'epatite C e non gli anticorpi ad esso.

In condizioni diverse, entrambi questi studi possono dare risultati falsi positivi e falsi negativi, quindi per una diagnosi più accurata, solo combinando questi risultati si può dare un quadro accurato della diagnosi. Se il metodo ELISA ha dato un risultato positivo, allora viene sicuramente eseguita un'analisi PCR per l'epatite C. Se dà anche un risultato positivo, la diagnosi viene confermata e al paziente viene detto che ha l'epatite C. Se il test ELISA è positivo e la PCR è negativa, significa che una persona è sana! Spesso questo accade dopo il trattamento dell'epatite C o dopo il trasferimento dell'epatite C in forma acuta, che è completamente guarita dal corpo.

Si verificano anche casi del genere. Circa il 15-20% dei pazienti può ammalarsi senza accorgersene e senza fare sforzi per il proprio recupero!

Dopo il trattamento per l'epatite C, viene eseguito regolarmente un test PCR per un anno per verificare una risposta virologica stabile. Oltre a un esame del sangue qualitativo mediante PCR, viene eseguito un esame del sangue per la carica virale e la genotipizzazione del virus dell'epatite C. Il valore normale è l'assenza di una carica virale. Il genotipo del virus dopo il trattamento può cambiare. Ciò suggerisce che il genotipo prevalente è stato curato con successo, ma ora è necessario trattarne un altro. Ci sono stati casi in cui il paziente aveva tre genotipi di epatite C. Ciò richiede un serio trattamento a lungo termine. L'analisi del genotipo del virus mostra solo la presenza del genotipo del virus dell'epatite C prevalente nel sangue.

Epatite C, come sconfiggerlo?

Per sconfiggere l'epatite C, non devi rilassarti e sperare in un miracolo o in medicina alternativa, ma vai in una clinica epatologica dove medici esperti trattano l'epatite C. L'esperienza di un medico è di fondamentale importanza per il successo della terapia, poiché solo le teorie nel trattamento questa complessa malattia virale non è abbastanza! Oggi, oltre al classico metodo di trattamento dell'epatite virale C - Interferone e Ribavirina, viene utilizzato l'ultimo regime terapeutico di una nuova generazione di farmaci: Harvoni. Questo è un prodotto di un'azienda farmaceutica americana, che comprende due nuovi medicinali: Sofosbuvir e Ledipasvir. Hanno un effetto completamente diverso sul virus, che consente un trattamento rapido ed efficace..

Epatite C e costipazione

L'epatite virale C provoca disturbi nel tratto gastrointestinale. I pazienti possono provare nausea, amarezza in bocca, bruciore di stomaco, disturbi delle feci - diarrea o costipazione, nonché gonfiore e flatulenza.

Analisi qualitativa per l'epatite C: trascrizione

La causa dello sviluppo dell'epatite virale C è l'infezione da un agente patogeno appartenente alla famiglia delle Flaviviridae. Tra l'infezione e l'inizio della produzione di anticorpi, viene rilevato un lungo intervallo di tempo, che non consente la diagnosi tempestiva della malattia attraverso un test immunosorbente enzimatico.

Se si sospetta un'infezione, vengono eseguite analisi PCR per epatite C, biochimica, OAC, test di funzionalità epatica. Mediante la reazione a catena della polimerasi, il virus può essere rilevato nel sangue anche nella prima settimana di infezione, che è il vantaggio dominante del metodo.

Analisi quantitativa e qualitativa dell'epatite C e caratteristiche dello studio, come prepararsi, se ci sono errori, decodifica - considereremo in dettaglio.

Qual è il metodo di reazione a catena della polimerasi??

Reazione a catena della polimerasi - una tecnica di ricerca molecolare per determinare il materiale genetico di un agente virale sin dai primi giorni di infezione. L'analisi è caratterizzata da un elevato grado di affidabilità, specificità, accuratezza. Grazie ad esso, non viene rilevata solo l'assenza / presenza del virus, ma anche la carica virale (valore quantitativo), genotipo.

Lo studio richiede il sangue del paziente, in cui si presume si trovi l'RNA dell'infezione virale. In condizioni di laboratorio, i primer vengono aggiunti al fluido biologico: si tratta di frammenti sintetizzati artificialmente del gene desiderato di piccola lunghezza. Inoltre l'RNA polimerasi è un enzima specializzato che moltiplica la concentrazione del materiale desiderato..

Inoltre, il sangue con l'aggiunta di componenti viene riscaldato e raffreddato più volte in un dispositivo speciale. Poi arriva l'analisi dei risultati ottenuti, il confronto con i geni noti dell'agente virale. Sulla base di questo, viene fatta una conclusione sulla malattia.

Tipi di ricerca PCR

L'analisi per l'epatite C PCR viene eseguita in laboratorio con l'aggiunta dei reagenti necessari, ha tre varietà con caratteristiche distintive:

  1. L'analisi qualitativa della PCR per l'epatite C è il primo passo nello studio. Attraverso di esso, il materiale genetico dell'agente patogeno viene rilevato nel siero del sangue.
  2. Uno studio quantitativo consente di valutare la carica virale: questo è il contenuto di materiale virale in 1 ml di sangue del paziente. Viene eseguito prima dell'inizio del corso di trattamento e quindi dopo 1-4-12 settimane di terapia. Quando il corso è lungo, lo studio deve essere effettuato dopo 24 settimane di terapia per valutare l'efficacia.
  3. Genotipizzazione. Una malattia infettiva si sviluppa rapidamente, il virus tende a mutare. Pertanto, è necessario identificare il genotipo del virus.

Gli scienziati hanno identificato 7 genotipi del virus. Nella Federazione Russa, 1-2-3 specie erano molto comuni.

Ciascuno dei genotipi è caratterizzato da resistenza al trattamento..

Ad esempio, con il tipo 1, l'efficacia della terapia è di circa il 60%, rispetto ai 2-3 tipi, l'indicatore raggiunge l'85%.

Per selezionare il farmaco giusto, la durata del trattamento, è necessario identificare non solo il fatto dell'infezione, ma anche la concentrazione del virus, il suo genotipo.

Indicazioni per

Marcatori per epatite, PCR ed ELISA, altri studi hanno alcune indicazioni mediche:

  • Quando il paziente ha una storia di infezione da HIV, AIDS.
  • Contatto con una persona infetta perché l'epatite virale è altamente contagiosa.
  • Sintomi di cirrosi epatica: epatomegalia, aumento delle dimensioni della milza, comparsa di un motivo venoso sull'addome, ecc..
  • Clinica di disfunzione epatica funzionale - dolore periodico / costante nell'ipocondrio destro, ingiallimento della pelle, nausea.
  • Valori elevati di AST e ALT nella biochimica del sangue.
  • Durante la gravidanza, quando i test di cattiva funzionalità epatica.
  • Prima di iniziare un corso antivirale per determinare la carica virale.
  • Per monitorare l'efficacia della terapia.
  • Dopo la terapia per prevenire la ricaduta dell'infezione virale.

La PCR viene eseguita con una diagnosi confermata di epatite B per escludere una forma mista di danno epatico.

Preparazione dello studio e campionamento del materiale

Come prepararsi per l'analisi, dirà il medico. Per ottenere un risultato accurato, si raccomanda la preparazione del paziente. Consiste nelle seguenti raccomandazioni:

  1. L'analisi dovrebbe essere presa al mattino, a stomaco vuoto. È consentito bere solo acqua pulita e non gassata prima del prelievo di sangue. Ultimo pasto - 8 ore prima della recinzione.
  2. Se non riesci a superare il test al mattino, questo può essere fatto di sera o a pranzo, soprattutto - 5-6 ore dopo aver mangiato, non prima.
  3. 48 ore prima dello studio, rinuncia all'alcol, bevande contenenti caffeina, succhi di frutta.
  4. Per 2 giorni è necessario seguire una dieta, esclusi tutti i prodotti dannosi. Tuttavia, alcuni medici ritengono che i cibi grassi e fritti non influiscano sulla precisione degli studi sulla PCR..

Non prendere la medicina 24 ore prima della manipolazione medica. Se ciò non è possibile, informare il proprio medico. Si sconsiglia di eseguire l'analisi immediatamente dopo l'ecografia, la TC, il massaggio e altre procedure fisioterapiche.

Il prelievo di sangue è il seguente:

  • Mediante uno speciale laccio emostatico serrato sull'avambraccio del paziente, il medico interrompe il flusso sanguigno venoso. Le vene diventano più visibili, il che facilita la procedura per l'inserimento di un ago, successivo prelievo di sangue.
  • L'area della pelle prima dell'introduzione di un ago sterile viene trattata con un liquido contenente alcol.
  • Un ago viene inserito in una vena, dopo di che viene attaccato un tubo ad esso, in cui entra il sangue.
  • Dopo l'inserimento dell'ago, il laccio emostatico viene rimosso. Raccogliere la quantità necessaria di sangue, rimuovere l'ago.
  • Un batuffolo di cotone imbevuto di alcool viene applicato nel sito di iniezione..

Per prevenire la formazione di un livido nel sito di iniezione, un batuffolo di cotone deve essere premuto saldamente contro l'area lesa, piegato il braccio e tenuto in questa posizione per 3-4 minuti.

Se il paziente assume farmaci che aiutano a fluidificare il sangue (aspirina, warfarin), potrebbero esserci alcuni problemi con l'interruzione del sanguinamento..

I vantaggi della PCR rispetto ad altri test

Il metodo di reazione a catena della polimerasi presenta alcuni vantaggi rispetto ad altri metodi diagnostici..

I vantaggi dello studio sono presentati nella tabella:

Diagnosi diretta dell'agente patogenoAltri studi forniscono una risposta: c'è un agente patogeno nel corpo o no. Ma utilizzando il metodo PCR, è possibile stabilire in modo specifico il tipo di agente virale.
Specificità dello studioLa PCR determina un frammento di DNA unico che corrisponde a un solo tipo di agente virale. Ciò riduce al minimo la possibilità di errore..
Alta sensibilitàÈ possibile rilevare anche una minuscola concentrazione del virus nel sangue..
Identificazione di tutti i patogeniDurante lo studio, è possibile rilevare tutti gli agenti patogeni.
Infezioni nascosteOltre al patogeno virale, è possibile identificare infezioni che hanno un decorso latente, sono caratterizzate da alta attività antigenica.

Quando il paziente riceve un risultato positivo, ciò significa che è stato rilevato materiale genetico patogeno per l'epatite nel fluido biologico. Risultato negativo: nessuna traccia del virus.

Decifrare i risultati

Il medico deve decrittografare i risultati in base alla conclusione che il paziente riceve in laboratorio. È necessario analizzare i dati insieme a indicatori di biochimica, OAC, ultrasuoni.

Qualità

Uno studio qualitativo mostrerà la presenza o l'assenza di un agente causativo di una malattia virale nel sangue umano. Ci possono essere due opzioni: negativa (norma) o positiva.

A volte il modulo dice: rilevato o non trovato.

Un risultato positivo: l'assistente di laboratorio ha rivelato il materiale genetico dell'agente virale nel sangue del paziente, l'infezione è confermata. Conclusione negativa: nessuna infezione, frammenti dell'RNA del virus sono al di sotto dei limiti di sensibilità.

quantitativo

L'analisi quantitativa implica diverse opzioni di risultato. Per comodità, li presenteremo sotto forma di un tavolo.

Risultatodecrittazione
NegativamenteQuesta è la norma per una persona sana. Pertanto, il materiale biologico studiato non contiene epatite virale RNA o il contenuto è inferiore alle soglie di suscettibilità.
Fino a 1,8 * 10 ^ 2 UI / mlDice che il contenuto di RNA è inferiore all'intervallo di quantificazione. Questo risultato deve essere interpretato attentamente, perché considerato controverso. Inoltre, vengono effettuati altri studi per il successivo confronto. Anche il test PCR viene ripetuto..
Fino a 8 * 10 ^ 5 UI / mlBassa carica virale. Di norma, un tale risultato significa che il trattamento è efficace..
Da 8 * 10 ^ 5 UI / mlAlta carica virale. Il trattamento è richiesto immediatamente (se non eseguito), oppure è necessaria la correzione del trattamento.
2,4 * 10 ^ 7 UI / mlL'RNA è maggiore del massimo di quantificazione superiore. Sullo sfondo di tale risultato, la carica virale non viene valutata. È richiesta una diluizione ripetuta di un campione di fluido corporeo..

genotipizzazione

Risultato: è stato rilevato acido ribonucleico di un genotipo specifico. Indica inoltre il genotipo e il sottotipo, l'assistente di laboratorio codifica la conclusione in lettere e numeri latini. Ad esempio, genotipo 1a. Un totale di 7 genotipi, 67 sottotipi.

Risultato - è stato rilevato l'RNA dell'epatite C virale - questo è un DNA di un genotipo raro che non può essere attribuito ai comuni agenti virali, pertanto sono necessari ulteriori diagnostici.

Quando la PCR è negativa e ELISA è positiva

L'epatologo o specialista in malattie infettive decodifica la conclusione dell'assistente di laboratorio. Esiste sempre il rischio di ricevere un risultato falso negativo o falso positivo. A volte capita che la PCR sia negativa e ELISA sia positiva.

Ciò significa che al momento non c'è virus nel sangue del paziente, ma ha sofferto di una malattia acuta. È generalmente accettato che ELISA mostri anticorpi prodotti dal sistema immunitario dopo aver invaso l'agente patogeno..

L'ELISA rispetto alla PCR è caratterizzato da bassa affidabilità e affidabilità, pertanto viene utilizzato come screening primario. Quando si diagnostica l'epatite virale senza reazione a catena della polimerasi non è possibile.

Costo del test dell'epatite C.

Puoi fare dei test in ospedale, dove viene osservato il paziente, se c'è il suo laboratorio o contattare un centro privato a pagamento.

In breve tempo, puoi ottenere il risultato in centri di laboratorio come Hemotest, Invitro, Helix.

Costi di ricerca a seconda del laboratorio:

Nome del servizio di laboratorioPolitica dei prezzi
Elica· Il costo della raccolta di materiale biologico - 170 rubli.

· Test PCR qualitativo + quantitativo - 3990 rubli.

· Identificazione di anticorpi della malattia virale - 1500 rubli (2-3 giorni).

· Controllo dell'attività del virus prima di iniziare un ciclo di terapia - 4090 rubli.

In vitro· Rilevazione quantitativa dell'RNA del virus dell'epatite C mediante PCR - 3140 rubli.

· L'assunzione di materiale biologico (sangue venoso) - 199 rubli.

· Valutazione della carica virale con rilevamento in tempo reale - 18000 rubli.

· Test ultra sensibile di alta qualità - da 3000 rubli.

· Conduzione della genotipizzazione - da 1250 rubli.

HemoTest· Il prezzo della ricerca quantitativa è di 2200 rubli.

· Diagnostica di alta qualità da 700 rubli.

· Determinazione dell'RNA dell'agente patogeno - da 4000 rubli.

· Prelievo di sangue da una vena di circa 150 rubli.

La durata dello studio è in media di 2-3 giorni. In alcuni laboratori esiste un servizio di analisi urgente, il cui costo è 1,5-2 volte superiore. È anche possibile chiamare un medico specialista a domicilio per donare il sangue e ricevere i risultati via e-mail o di persona quando si contatta il laboratorio.